[0001] 本发觉属于植物机闭提拔手艺规模,全部涉及重水植物奥古狐尾藻的组培和迅速 滋生手腕,该手腕是诈骗统统无菌和肃穆的控温手段,杀青了重水植物正在尝试室豪爽临蓐, 并能够施行到生态情况修复。
[0002] 奥古狐尾藻属于被子植物门(Angiospermae)双子叶植物纲(Dicotyledoneae)小 二仙草科(Haloragidaceae)。目前湖泊生态修复工程中举动清水东西种和植被光复前卫物 种、鱼虾蟹塘养殖历程中举动饵料、逃亡和产卵场地,以及室内赏玩水族养殖历程中举动布 景资料的急迫须要。使用机闭提拔手艺,取得并大范围扩繁其优质工程苗,以战胜该物种正在 自然情况中种源有限且污染主要的题目。
[0003] 目前闭于狐尾藻机闭提拔的报道较量众,然则除了穗花狐尾藻外都没有全部落实 到是何种狐尾藻。况且闭于奥古狐尾藻的心理生化,以及生态学方面的报道都额外特别。虽 然它有狐尾藻属的配合性格,然则其本身的特征也导致组培的体例和前提有改变。
[0004] 本发觉供应了一种奥古狐尾藻机闭提拔与迅速滋生手腕。该手腕是正在无菌前提 下,选用控温手段,赐与固定光照,提拔无菌苗系统,可终年供应豪爽无菌小苗。手腕易行, 操作便当,产量高。
[0007] A、外植体选拔与预管制:选拔成长健旺,颜色鲜绿,无病虫害的茎段举动外植体, 用碱性洗涤剂浸泡30min,再正在自来水下冲洗2h,用蒸馏水几次冲洗4-5次,用无菌水再反 复冲洗4-5次,置于无菌操作台。
[0008] B、外植体灭菌:正在无菌操作台上起初用70% (体积比)乙醇浸泡15s,用无菌水冲 洗4-5次,再用0。1% (质料体积比)氯化汞实行外外消毒2-5min,无菌水冲洗4-5次,放 入0。15% (质料体积比)的无菌柠檬酸溶液中切割,正在无菌滤纸大将水吸干,待用。
[0009] C、愈伤机闭和芽诱导:将0。 5_2cm的去除叶片的步调B中的奥古狐尾藻外植体接 入诱导提拔基中,于光照提拔箱中静置提拔,诱导愈伤机闭和小芽。
[0011] D、增殖提拔:可陆续运用步调C的提拔基,用于增殖提拔。也可待小芽成长到 I。 5-2cm,调动增殖提拔基,进一步扩充滋生,变成小苗。
[0013] 每隔20-25d继代一次,变成的小苗,切成0。 5-2。 0cm,转入诱导提拔基或增殖提拔 基,正在与步调D肖似提拔前提下陆续实行增殖提拔,扩繁植株;
[0014] E、生根:愈伤机闭陆续成长,小苗成长到4-6cm阁下,能够不调动提拔基陆续正在步 骤C的提拔基上长出根,也能够调动为生根提拔基,不只可煽动其生根,也可加快成长。
[0015] 所述的生根提拔基为:1/2MS液体提拔基+NAA0。 10mg/L+蔗糖1。 5%,pH 5。 8-6。 0。F、炼苗和移栽:待大概根长至2。Ocm以上时,掀开瓶盖,室温下炼苗l-2d后,取出 试管苗,洗净其根部提拔基,移栽至室外水体中。
[0040] 本发觉供应的奥古狐尾藻机闭提拔与迅速滋生手腕,可正在短期供应豪爽的小苗, 为进一步对奥古狐尾藻的心理生化特色的研宄供应源源陆续的资源。通过愈伤机闭的传代 更易于存储和支柱种植资源的质料。一个长Icm的茎段源委一周的提拔,能行成一块面积 为0。 25cm2的愈伤机闭,再经三周的提拔可取得6-8个小苗,每个小苗长5-8cm,增殖倍数达 到6-8倍,一年一个芽可滋生数亿棵以上小苗。以一个芽20d继代一次,每次的增殖倍数为 8计较。
1。 一种奥古狐尾藻机闭提拔与迅速滋生手腕,其步调是: A、 外植体选拔与预管制:选拔成长健旺,颜色鲜绿,无病虫害的茎段举动外植体,用碱 性洗涤剂浸泡30min,再正在自来水下冲洗2h,用蒸馏水几次冲洗4-5次,用无菌水再几次清 洗4-5次,置于无菌操作台; B、 外植体灭菌:正在无菌操作台上起初用70%体积比乙醇浸泡15s,用无菌水冲洗4-5 次,再用0。 1%质料体积比氯化汞实行外外消毒2-5min,无菌水冲洗4-5次,放入0。 15%质料 体积比的无菌柠檬酸溶液中切割,正在无菌滤纸大将水吸干,待用; C、 愈伤机闭和芽诱导:将0。 5-2cm的去除叶片的步调B中的奥古狐尾藻外植体接入诱 导提拔基中,于光照提拔箱中静置提拔,诱导愈伤机闭和小芽; 所述的诱导提拔基为:MS固体提拔基+6BA 0。 50-2。 00mg/L+NAA 0。 25-0。 50mg/L+蔗糖 3%质料体积比,pH 5。8-6。 0 ; D、 增殖提拔:可陆续运用步调C的提拔基,用于增殖提拔;也可待小芽成长到 I。 5-2cm,调动增殖提拔基,进一步扩充滋生,变成小苗; 所述的增殖提拔基为:1/2MS液体提拔基+ 6BA 0。 50-2。 00mg/L+NAA 0。 25-0。 50mg/L+ 蔗糖 I。 5%,pH 5· 8-6。 0 ; 每隔20-25d继代一次,变成的小苗,切成0。 5-2。 0cm,转入诱导提拔基或增殖提拔基, 正在与步调D肖似提拔前提下陆续实行增殖提拔,扩繁植株; E、 生根:愈伤机闭陆续成长,小苗成长到4-6cm阁下,能够不调动提拔基陆续正在步调C 的提拔基上长出根,也能够调动为生根提拔基; 所述的生根提拔基为:1/2MS液体提拔基+NAA 0。 10mg/L +蔗糖1。 5%,pH 5。 8-6。 0 ; F、 炼苗和移栽:待大概根长至2。 Ocm以上时,掀开瓶盖,室温下炼苗l-2d后,取出试管 苗,洗净其根部提拔基,移栽至室外水体中; 以上步调C,D,E均为无菌情况,光照40-60 μ E/ (m2 · s),光照周期为12h/d,室内温度 25±2°C。
2。 按照权力请求1所述的手腕,其特色正在于:步调B中氯化汞的消毒工夫为2min ;步调 C和D中,6BA的浓度为0· 50mg/L,NAA的浓度为0· 25mg/L。
【专利摘要】本发觉公然了一种奥古狐尾藻机闭提拔与迅速滋生手腕,其步调是:A。外植体选拔:选拔成长健旺,颜色鲜绿,无病虫害的植物茎举动外植体。B。外植体灭菌:用酒精和氯化汞管制外植体。C。芽诱导:选拔最佳的激素配比诱导芽成长。D。增殖提拔:安排激素配比和提拔基浓度实行增殖提拔。E。生根:选拔适当的细胞成长素实行生根诱导。F。炼苗和移栽:正在提拔箱中掀开瓶口提拔两天,正在转入自然水体中提拔。该手艺能够不受时令和情况局限,提拔出豪爽无菌苗,供水生生态体例光复之用。
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一种根为外植体的文冠果机闭提拔疾繁手腕及其提拔的文冠果大概芽的制制手腕